การทดสอบโปรตีนแบบโคโลริเมทรี (วิธีแบรดฟอร์ด)

การหาปริมาณความเข้มข้นโปรตีนโดยการจับสีย้อมคูมาสซีบริลเลียนต์บลู

Colorimetry Advanced (University) 60 นาที ~$15.00

วัตถุประสงค์

หาความเข้มข้นโปรตีนของตัวอย่างที่ไม่รู้จักโดยใช้การทดสอบแบรดฟอร์ดและกราฟสอบเทียบ BSA

ความเป็นมา

The Bradford assay is one of the most widely used methods for protein quantification in biochemistry laboratories. Coomassie Brilliant Blue G-250 dye binds to protein molecules, shifting its absorption maximum from 465 nm (unbound, red/brown) to 595 nm (bound, blue). The increase in absorbance at 595 nm is proportional to the amount of protein present. The method is fast, sensitive (1–25 μg/mL range), and relatively free from interference by most common reagents.

คำเตือนด้านความปลอดภัย

  • Bradford reagent contains phosphoric acid and methanol
  • Coomassie dye stains everything it contacts
  • Wear gloves to protect from dye and acid
  • Use disposable cuvettes to avoid staining

อุปกรณ์ป้องกันส่วนบุคคลที่จำเป็น

goggles gloves lab_coat

วัสดุ

  • Bradford reagent (Coomassie Blue G-250) (100 mL)
    Commercial or freshly prepared
  • BSA standard (bovine serum albumin) (10 mL)
    1 mg/mL stock
  • Unknown protein sample (5 mL)
  • Distilled water (200 mL)

อุปกรณ์

Spectrophotometer Cuvettes (plastic, disposable recommended) Micropipettes (20–1000 μL) Test tubes (8) Vortex mixer

ขั้นตอนปฏิบัติ

1

Prepare BSA standards: 0, 2, 5, 10, 15, 20, 25 μg/mL by diluting the 1 mg/mL stock in water.

10 นาที
2

Add 100 μL of each standard and unknown sample to separate test tubes.

5 นาที
3

Add 5 mL of Bradford reagent to each tube. Mix by gentle vortexing or inversion. Do not create bubbles.

5 นาที Reagent contains acid
4

Incubate for 5 minutes at room temperature (do not exceed 60 minutes as color will begin to fade).

5 นาที
5

Measure absorbance at 595 nm. Zero with the 0 μg/mL blank.

15 นาที
6

Plot the calibration curve (absorbance vs. BSA concentration). Note that the Bradford assay curve is slightly nonlinear at higher concentrations.

10 นาที
7

Determine the protein concentration of the unknown from the calibration curve. Account for any dilutions made.

10 นาที

ผลลัพธ์ที่คาดหวัง

The calibration curve shows absorbance increasing with BSA concentration, with slight deviation from linearity above 15 μg/mL. The color change from brown/red to blue is clearly visible. The unknown protein concentration should be determinable within the calibration range.

การทำความสะอาด

Dispose of Bradford reagent waste in designated containers. Use disposable cuvettes if possible. Clean any spills immediately as the dye stains permanently.

รายละเอียด

หมวดหมู่
Colorimetry
ระดับความยาก
Advanced (University)
ระยะเวลา
60 นาที
ค่าใช้จ่ายโดยประมาณ
$15.00
ขั้นตอน
7
วัสดุ
4

การทดลองเพิ่มเติม

การตรวจสอบกฎของเบียร์-แลมเบิร์ต 60 min การวิเคราะห์ส่วนผสมโดยสเปกโตรโฟโตเมทรี 75 min การวิเคราะห์สีผสมอาหารโดยสเปกโตรโฟโตเมทรี 60 min การหาปริมาณกลูโคสแบบโคโลริเมทรี 60 min การหาปริมาณฟอสเฟตแบบโคโลริเมทรี 90 min การหาปริมาณเหล็กในน้ำ 75 min การหาปริมาณแอสไพรินโดยสเปกโตรโฟโตเมทรี 75 min

Frequently Asked Questions

What is the objective of การทดสอบโปรตีนแบบโคโลริเมทรี (วิธีแบรดฟอร์ด)?
หาความเข้มข้นโปรตีนของตัวอย่างที่ไม่รู้จักโดยใช้การทดสอบแบรดฟอร์ดและกราฟสอบเทียบ BSA
How difficult is การทดสอบโปรตีนแบบโคโลริเมทรี (วิธีแบรดฟอร์ด)?
This experiment is rated as Advanced (University). It takes approximately 60 minutes to complete.
What safety precautions are needed for การทดสอบโปรตีนแบบโคโลริเมทรี (วิธีแบรดฟอร์ด)?
Key safety precautions include: Bradford reagent contains phosphoric acid and methanol; Coomassie dye stains everything it contacts; Wear gloves to protect from dye and acid.
What materials are needed for การทดสอบโปรตีนแบบโคโลริเมทรี (วิธีแบรดฟอร์ด)?
The main materials required are: Bradford reagent (Coomassie Blue G-250), BSA standard (bovine serum albumin), Unknown protein sample, Distilled water.
What results should I expect from การทดสอบโปรตีนแบบโคโลริเมทรี (วิธีแบรดฟอร์ด)?
The calibration curve shows absorbance increasing with BSA concentration, with slight deviation from linearity above 15 μg/mL. The color change from brown/red to blue is clearly visible. The unknown protein concentration should be determinable within the calibration range.